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有了這些資料,使用DAB染色液會更輕松
更新時間:2022-10-28   點擊次數:776次
  DAB染色液運用還原態無色亞甲藍則在病變細胞內Fe2+強烈催化下,迅速被細胞內廣泛存在的活性氧氧化,變為有色的氧化態亞甲基藍。目前,DAB染色液用于免疫組化染色,應用在Dako自動染色系統上。

  原理:細胞顆粒中的過氧化物酶,能將過氧化氫中的氧釋放出來,氧化二氨基聯苯胺,形成金黃色沉淀而定位于過氧化物酶活性的部位。

 

  DAB染色液的使用方法:
  1.DAB顯色液配制:10mM Tris-HCl(pH7.6)9mL +DAB(diaminobezidin3,3-二氨基聯苯胺)+0.3%(W/V)NiCl2 或CoCl2 1mL,顯色時加入5-10mL 30%H2O2混勻后立即使用;
  2.顯色:準備好含有待測蛋白的固相膜:包括電泳、轉印、封阻、一抗處理、辣根過氧化酶(HRP)標記的二抗(或鏈霉親和素)處理、清洗等步驟;
  3.加入適量的DAB顯色液,鋪滿整個固相膜表面。
  4.置于平式搖蕩儀上,在室溫下孵育2至5分 鐘,避免光照,直至棕褐色沉淀出現。
  5.用鑷子夾起固相膜,放進無離子水里清洗。
  6.空氣中晾干。
  7.拍照記錄 。

  DAB染色液的注意事項:
  1.DAB溶液應低溫密封保存。如有結晶析出,應確保結晶溶解再行使用;
  2.顯色工作液應現用現配,新鮮配制的工作液應為無色或淺棕色,如顏色過深,請勿使用;
  3.DAB在常溫下不穩定,每次取用后均應及時加蓋密封放回冰箱,以免因DAB分解影響實驗,或因滲漏造成實驗環境污染;
  4.DAB有潛在致突變作用,操作時應注意穿戴好防護用具。

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